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支原體檢測,工業(yè)和科研有何不同?

更新時間:2022-11-04  |  點擊率:872

細(xì)胞培養(yǎng)中的支原體檢測,分為工業(yè)檢測實驗室檢測。


工業(yè)包括生物藥生產(chǎn)、CAR-T、干細(xì)胞治療、疫苗生產(chǎn)等,需要對主細(xì)胞庫、病毒收獲液、體外擴(kuò)增的細(xì)胞等進(jìn)行支原體檢查。該檢查的方法依據(jù)是藥典。

普通科研實驗室中的支原體檢測則需要保證細(xì)胞中沒有支原體污染,沒有詳細(xì)的方法規(guī)定。


那么,工業(yè)和科研檢支原體還有哪些區(qū)別呢?


檢測方法方面


工業(yè)可使用培養(yǎng)法、指示細(xì)胞培養(yǎng)法和NAT法(核酸擴(kuò)增技術(shù)Nucleic acid testing)。NAT法最常見的就是PCR和熒光定量PCR。只限定了這三種。NAT在方法驗證后,可以替代前面兩種方法。適合CAR-T等的放行檢測。


科研則可采用各種方法,但一般不采用培養(yǎng)法,因為該方法耗時長,效率低??蒲袡z支原體常見方法有PCR法、qPCR法、酶熒光法、恒溫擴(kuò)增法、DNA染色法、細(xì)胞感應(yīng)法等。


用途方面


工業(yè)檢支原體用于過程控制、放行檢測。生產(chǎn)前和生產(chǎn)后的成品都需要檢。


科研檢支原體是避免支原體污染細(xì)胞,干擾實驗,一般是一周就要監(jiān)測一次。


污染程度


工業(yè)上支原體污染風(fēng)險主要是存在于細(xì)胞和成品中,需檢測的樣本,不一定是含血清的培養(yǎng)體系。在該過程中,如果發(fā)生支原體污染,通常情況下,支原體含量會比較低,因而需要方法的靈敏度高,達(dá)到10CFU/ml。


科研上支原體污染的風(fēng)險,主要是存在于細(xì)胞培養(yǎng)過程中??蒲羞^程中,如果發(fā)生支原體污染,往往因檢測不及時而更容易被忽視。再加上培養(yǎng)液中含有血清,支原體繁殖較快,一旦出現(xiàn)癥狀時,支原體的污染程度已經(jīng)處于較高的水平,因而對方法的靈敏度相對會低一些,而更看重方便程度。


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