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誰(shuí)動(dòng)了你的細(xì)胞——趕走支原體

更新時(shí)間:2020-06-04  |  點(diǎn)擊率:1140

為什么有些細(xì)胞實(shí)驗(yàn)無(wú)法重復(fù)?

為什么有的細(xì)胞在相當(dāng)長(zhǎng)的時(shí)間里,都養(yǎng)不到狀態(tài)?

為什么實(shí)驗(yàn)室中,超過(guò)一株以上的細(xì)胞都時(shí)好時(shí)壞?

細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢、細(xì)胞變形、碎片增加懸浮細(xì)胞容易成團(tuán)、培養(yǎng)基提前變色、鏡下發(fā)現(xiàn)有小黑點(diǎn)……

 

如果排除了其他試劑選擇不當(dāng)、細(xì)胞株老化、細(xì)菌污染等原因,而仍有上述一種或幾種情況,則高度提示——你的細(xì)胞可能被支原體污染了!

 

. 電鏡下的支原體

 

支原體污染普遍存在

據(jù)美國(guó)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì),細(xì)胞發(fā)生支原體污染的幾率在70%以上。同時(shí),由于支原體直徑很小,僅在180nm~350nm之間,只有通過(guò)電鏡才能看到,不易被實(shí)驗(yàn)者肉眼發(fā)覺(jué),支原體污染逐漸成為一個(gè)普遍存在的問(wèn)題。

支原體污染的危害

支原體污染是個(gè)循序的過(guò)程,普通抗生素對(duì)其無(wú)效。因此,支原體污染有多煩人,相信實(shí)驗(yàn)人都領(lǐng)教過(guò)了。

1、細(xì)胞狀態(tài)不佳,生長(zhǎng)速度慢,實(shí)驗(yàn)無(wú)法推進(jìn)。

2、細(xì)胞內(nèi)DNA、RNA及蛋白表達(dá)發(fā)生改變,影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)不準(zhǔn)確,時(shí)間、經(jīng)費(fèi)的浪費(fèi)。

3、一株污染的細(xì)胞成為實(shí)驗(yàn)室的污染源,對(duì)工作區(qū)域以及培養(yǎng)箱和液氮罐造成污染,進(jìn)而污染其他細(xì)胞,導(dǎo)致其他細(xì)胞繼發(fā)性污染,實(shí)驗(yàn)受影響,數(shù)據(jù)無(wú)法重復(fù),預(yù)期結(jié)果出不來(lái)。

如何有效把支原體趕出細(xì)胞?

對(duì)于已耗費(fèi)很多時(shí)間、大量擴(kuò)增起來(lái)的細(xì)胞,或經(jīng)過(guò)基因轉(zhuǎn)染、體外刺激等大量工作處理過(guò)的細(xì)胞,如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞被支原體污染了,怎么辦?由于前期工作量巨大,我們無(wú)法丟棄已有細(xì)胞。但由于價(jià)格原因,又無(wú)法使用那些昂貴試劑殺除細(xì)胞上的支原體,同時(shí),實(shí)驗(yàn)人員還需要清除細(xì)胞上的支原體污染,讓實(shí)驗(yàn)得以往下推進(jìn),以終獲得準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

實(shí)驗(yàn)者可選用對(duì)支原體*的抑制劑,通過(guò)對(duì)細(xì)胞的前期處理,中期加藥,逐步通過(guò)4代左右的培養(yǎng),從而將支原體污染*清除,確保試驗(yàn)順利推進(jìn),結(jié)果準(zhǔn)確。*此類試劑眾多,締一生物生物周圍的實(shí)驗(yàn)人做過(guò)很多嘗試,其中效果確切且性價(jià)比很高的當(dāng)屬德國(guó)Minerva公司的ZellShield®祛除劑。

Zell Shield®是一種即用型新型復(fù)合抗生素,副作用極低,能有效地祛除細(xì)胞培養(yǎng)支原體、細(xì)菌、真菌污染。Zell Shield®使用方法簡(jiǎn)單,直接加入培養(yǎng)基中保護(hù)細(xì)胞。

它的原理:通過(guò)抑制支原體增殖中某種蛋白的合成,達(dá)到抑制新的支原體增殖的目的。屬?gòu)?fù)合型的新型抗生素。它廣泛適用于細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)的科研和工業(yè)領(lǐng)域。

特點(diǎn)

1、適用范圍廣

普通細(xì)胞培養(yǎng)和原代細(xì)胞培養(yǎng)

2、無(wú)細(xì)胞毒性

目前,Zell Shield®對(duì)多種細(xì)胞系都無(wú)細(xì)胞毒性。

3、高效廣譜

祛除支原體效果明顯,同時(shí)對(duì)細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞外的革蘭氏陰性菌、革蘭氏陽(yáng)性菌、病原蟲(chóng)、真菌等污染亦可有效預(yù)防。

4、操作簡(jiǎn)便

可直接加入到預(yù)處理的培養(yǎng)基或細(xì)胞中進(jìn)行消毒。

5、穩(wěn)定性高

在細(xì)胞孵育期內(nèi),Zell Shield®始終保持穩(wěn)定的活性。

6、低耐藥風(fēng)險(xiǎn)

精心挑選的新型復(fù)合抗生素只有極低的耐藥風(fēng)險(xiǎn),多種抗生素聯(lián)合使用幾乎不會(huì)產(chǎn)生耐藥突變株。

操作步驟:

第1步:研究發(fā)現(xiàn),98%的支原體污染發(fā)生在細(xì)胞間隙。因此,首先要把細(xì)胞消化下來(lái),放入離心管,懸浮沖洗,離心,棄上清,反復(fù)三次。此時(shí)可將細(xì)胞上大部分的支原體去除,為進(jìn)一步加藥抑制做好準(zhǔn)備。

第二步:培養(yǎng)液中加入1%的ZellShield®,細(xì)胞進(jìn)行正常培養(yǎng)。新的支原體增殖受到抑制,舊的支原體隨著細(xì)胞的換液逐步減少,通過(guò)4代左右的培養(yǎng),細(xì)胞中的支原體基本可被*清除。

注:使用ZellShield®時(shí),不需使用鏈青霉素。

此試劑價(jià)格約2200元/50ml,可保證大量細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)得以順利推進(jìn)。

總之,細(xì)胞培養(yǎng)中,支原體污染發(fā)生頻繁。有時(shí)帶來(lái)的危害會(huì)造成實(shí)驗(yàn)的巨大損失。應(yīng)經(jīng)常檢測(cè)和及時(shí)排除支原體污染,讓細(xì)胞在健康安全的環(huán)境下生長(zhǎng),為獲得準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,打下良好的基礎(chǔ)。

 
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